农药选择性多残留方法(三)

3、农药测定方法

(1)方法一：50％乙睛-水[高效液相色谱级(HPLC级)]作为流动相，选择性多控制流动相的残留流速为1.48～1.52mL/min。

控制0.05mol/L氢氧化钠溶液和OPA-MERC反应溶液(试剂制备见下)的农药流速分别为0.48～0.52mL/min。柱温为35℃，选择性多水解室的残留温度为100℃。荧光检测器的农药激发波长为340nm，发射波长为455nm。选择性多狭缝宽度分别为15m和12nm。残留检测器的农药光电倍增管设为低值，时间常数为1s。选择性多调节检测器灵敏度，残留使1.0ng克百威溶液的农药响应为记录仪或积分仪量程的45％～55％。基线噪声应该＜2％，选择性多氨基甲酸酯类杀虫剂应按照图7-2的残留步骤洗脱。

如果系统停用几天，则用甲醇代替水移动相清洗系统。从储液器中倒出氢氧化钠和OPA-MERC反应溶液，并用水清洗储液器和相连的管子后，再用甲醇清洗。当再次使用系统时，将流动相改为水(HPLC级)，在储液器中加反应溶液前用水清洗储液器和相连管子。

过滤由净化后所得到的圆底烧瓶中的甲醇提取液，将收集到的滤液(约4.5mL)置于10mL离心管或其他合适的容器中。因为样品浓度已知，因此收集的滤液体积多少不是十分重要。如果溶液要求稀释，则吸取一定量溶液至另一容量瓶定容至一定体积备用。取10μL甲醇溶液进样。通过农药样品在色谱图上的保留时间来定性。通过将待测农药色谱峰的峰高或峰面积与已知量的标准样品的峰高或峰面积相比较来测得未知农药残留的含量。为了保证农药残留量测定的可靠性，进待测样品后立即进标样，待测样品色谱峰和标样色谱峰应匹配在±25以内。

(2)方法二：此法用于不需要柱后水解和衍生化的荧光农药残留检测。高效液相色谱系统的建立与操作同上述方法一，区别在于：水解室在室温下操作；荧光检测器的激发波长为288nm，发射波长为330nm。将氢氧化钠溶液和OPA-MERC反应溶液加入流动相时，关闭泵或氮气流。

测定操作方法同方法一。

(3)试剂制备

①乙腈：全玻璃蒸馏装置重蒸。在使用前，进行脱气处理(将乙腈置于玻璃瓶中，抽真空并用磁力搅拌子缓慢搅拌5min)，经过处理的乙腈优于高效液相色谱级，可以避免产生杂峰。

②MERC：2-巯基乙醇(MERC)。

③甲醇：全玻璃蒸馏装置重蒸。

④邻苯二醛(OPA)：色谱级。

⑤0.05mol/L硼酸钠缓冲溶液：称取19.1g分析纯：Na₂B₄0₇·10H₂0，用约500mL脱气的高效液相色谱级水在水浴中加热溶解，室温下冷却，再用脱气的高效液相色谱级水定容至1L，轻轻地将溶液摇匀，尽量避免空气进入溶液中。

④0.05mol/L氢氧化钠溶液：即取一份氢氧化钠(碳酸钠的含量＜5％)。用一份水溶解。塞紧盖后静置大约10d，直到碳酸钠沉入下层。吸取27mL上部澄清的氢氧化钠溶液，转入10mL容量瓶，并用水定容，得到5mol/L氢氧化钠溶液。吸取10mL5mol/L氢氧化钠溶液，加入1L容量瓶中，用脱气的高效液相色谱级水定容，轻轻地将溶液摇匀，尽量避免空气进入溶液中。

⑦水(高效液相色谱级)：商品纯水或用纯化水装置制备的蒸馏水或去离子水，用于高效液相色谱时，按乙腈脱气的相同方法进行脱气。水必须尽量纯化以防止堵塞高效液相色谱柱或出现异常峰形。用于高效液相色谱的水必须是高效液相色谱级的(不特别指明为高效液相色谱级的水是指蒸馏水)。

⑧OPA-MERC反应溶液：称取500mg邻苯二醛(OPA)加入1L容量瓶中，用10mL甲醇溶解，加入500mL0.05mol/L硼酸钠缓冲液和1mL2-巯基乙醇(MERC)。用硼酸钠缓冲液定容，轻轻地将溶液摇匀，尽量避免空气进入溶液中。(从市场购得的塑料瓶中的硼酸盐溶液或者低纯度的邻苯二醛会造成荧光背景过高)。制备的溶液可以在室温下保存2d，在冰箱或在氦气保护下可以储存1周左右。

二、苯脲类除草剂多残留分析

(一)方法原理与适用性

苯脲类除草剂用甲醇提取，提取液采用液液分配和弗罗里硅土柱色谱净化。残留物采用反相柱，柱后光解、衍生化，衍生物经高效液相色谱(HPLC)荧光检测器检测。

本方法可用于14种非脂肪性样品中至少14种苯脲类除草剂在0.05mg/kg、0.5mg/kg和1.0mg/kg水平的残留分析。

(二)标准溶液配制

每种标准品用高效液相色谱级异丙醇配制储备溶液(1mg/mL)。取适量的每种储备标准溶液混合，用乙腈-水(高效液相色谱级)(1∶1)稀释成工作标样。用1.25μg/mL的标样进行高效液相色谱检测。储备溶液保存在冰箱中，每周重新配制工作标样。

(三)提取

称取50g样品，加入离心瓶中，加100mL甲醇，用Polytron匀浆仪，速度8档，匀浆1.5min。匀浆液以1500r/min离心5min，倾出80～100mL上清液，用玻璃棉过滤，250mL量筒接收。向离心瓶中加100mL甲醇，8档匀浆1min。离心，上清液用玻璃棉过滤，全部转入上面的250mL量筒。记录全部甲醇提取液体积。

(四)液液分配

将甲醇提取液全部转入500mL分液漏斗。加30mL饱和氯化钠溶液和50mL正己烷，振摇30s，静置分层。下层水相转入1L分液漏斗中，分液漏斗中先加500mL水和30mL饱和氯化钠溶液。弃去己烷相。向1L分液漏斗中加200mL二氯甲烷，振摇1min。二氯甲烷相经25mm×50mm无水硫酸钠柱脱水，转入装好的具5mL刻度接收瓶的500mLK-D浓缩器中。水相用100mL二氯甲烷提取2次，脱水后一并转入K-D浓缩器。用50mL二氯甲烷淋洗硫酸钠柱，淋洗液一并转入K-D浓缩器。在K-D浓缩器中加入沸石，浓缩至约3mL，转入弗罗里硅土柱净化。

(五)弗罗里硅土柱净化

称取4g活化的弗罗里硅土，装入10mm内径色谱柱，上面加1cm硫酸钠，用30mL二氯甲烷预淋，弃去淋洗液。

当二氯甲烷层接近硫酸钠层顶部时，将具5mL刻度接收瓶的250mLK-D浓缩器置于色谱柱下。将浓缩的提取液转入色谱柱，容器用约3mL二氯甲烷润洗，润洗液转入色谱柱。

当提取液接近硫酸钠层顶部时，用3mL二氯甲烷淋洗色谱柱2次，使每次的淋洗液均接近硫酸钠层顶部。最后一次润洗液接近硫酸钠层顶部时，用50mL20％丙酮-二氯甲烷淋洗色谱柱。淋洗液在蒸汽浴上浓缩至约3mL，移去接收瓶，40℃水浴用氮气浓缩至干。移取2mL乙腈-水(高效液相色谱级)(1∶1)，加入接收瓶中。

(六)测定

测定采用高效液相色谱仪(HPLC)进行，柱后光解、衍生，荧光检测。

1、原理乙腈一水中的残留物以甲醇一水为流动相，经C₁₈反相柱梯度洗脱、分离，柱中洗脱的残留物(流出物经过Teflon套管以增加在紫外光下的暴露)在线光解为胺，胺在线与邻苯二醛及2-巯基乙醇反应生成荧光基团，通过荧光检测器检测。本法对苯脲类除草剂有极强选择性。

2、仪器

(1)溶剂过滤装置：具Luer—Lip头的10mL注射器，配备直径13mm的sueling不锈钢过滤头、直径13mm的5μmLS型滤器或直径13mm用聚丙烯固定的0.2μm尼龙滤膜。也可用元需注射器的预装好的装置。

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