葡萄籽维生素E软胶囊中原花青素和维生素E的快速测定（二）

（4）液相色谱条件

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，葡萄DikmaDiamons订C18（4.6mm×150mm，籽维中原5μm）；流动相：甲醇；流速：1.0mL/min；检测波长：284nm柱温：30℃；进样量：10μL。生素素和素E速测

（5）标准溶液工作曲线

精密称取105℃干燥至恒重的胶囊原花青素对照品28.63mg和维生素E醋酸酯对照品12.42mg于同一个10mL容量瓶中，加适量甲醇溶解并稀释至刻度，花青摇匀，维生得到混合对照品贮备液。快定该贮备液避光保存。葡萄混合标准贮备液适量，籽维中原逐级稀释，生素素和素E速测配制成原花青素浓度为0.2806、胶囊0.8417、花青1.4028、维生1.9640、快定2.8057mg/mL，葡萄维生素E醋酸酯浓度为0.1236、0.3707、0.6179、0.8651、1.2358mg/mL的混合标准溶液，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，DikmaDiamons订C18（4.6mm×150mm，5μm）；流动相：甲醇；流速：1.0mL/min；检测波长：284nm柱温：30℃；进样量：10μL。的色谱条件进样分析，记录色谱图。以峰面积积分值为纵坐标，对照品浓度为横坐标，进行线性回归，原花青素在0.2806～2.8057mg/mL浓度范围内，维生素E醋酸酯在0.1236～1.2358mg/L浓度范围内呈良好的线性关系。二者的线性相关系数均为0.999以上，两组分线性回归方程、相关系数如表1所示。

二、结果与分析

1、紫外最大吸收波长的选择

将维生素E醋酸酯对照品溶液注入液相色谱仪（配备DAD紫外检测器），开启光谱采集，在主成分峰位置观察最大吸收波长（见图2）。结果表明：维生素E醋酸酯对照品的最大吸收波长与检测波长284nm一致。

2、样品处理时超声时间的选择

本试验同时考察5个不同超声提取时间，分别为5min，10min，20min，30min，40min，对原花青素及维生素E加标样品的提取效果，回收率随时间变化关系如图3。

结果显示，在超声提取5min情况下，样品中原花青素和维生素E两组分提取不完全，回收率较低；当超声时间延长至10min时，两组分回收率有所增加，当超声提取时间延长至20min时，提取液中两组分回收率均达到最高；超声提取30min、40min后两组分回收率基本稳定且略有下降，因此实验采用超声提取20min的方法可有效提取葡萄籽维生素E软胶囊中的原花青素和维生素E。

3、稳定性考察

称取葡萄籽维生素E软胶囊（批号20190115）内容物约100mg，精密称定。精密称取葡萄籽维生素E软胶囊（批号20190115）内容物0.1g于25mL烧杯中，加入10mL甲醇，置于70℃水浴中加热，振摇使内容物分散，立即转移至25mL容量瓶中，再用10mL甲醇分三次洗涤烧杯，洗涤液转入容量瓶，超声提取20min，取出，冷却至室温，用甲醇定容至刻度，摇匀，经0.22μm微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。分别于制备后0，2，4，6，8，10，12h进样测定，记录色谱图，计算得12h内原花青素色谱峰面积RSD为0.3％，维生素E醋酸酯色谱峰面积RSD为0.1％，说明供试品溶液在12h内稳定（见表2）。

4、重复性试验

称取葡萄籽维生素E软胶囊（批号20190115）内容物6份，每份约100mg，精密称定。精密称取葡萄籽维生素E软胶囊（批号20190115）内容物0.1g于25mL烧杯中，加入10mL甲醇，置于70℃水浴中加热，振摇使内容物分散，立即转移至25mL容量瓶中，再用10mL甲醇分三次洗涤烧杯，洗涤液转入容量瓶，超声提取20min，取出，冷却至室温，用甲醇定容至刻度，摇匀，经0.22μm微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。计算得6份样品原花青素与维生素E（以α-生育酚计）含量平均值分别为41.44g/1009（RSD为0.9％）、16.80g/100g（RSD为1.1％），表明本法重复性良好（见表3）。

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