真菌Simplicilliumlanosoniveum色素的分离表征及培养基优化（三）

5、真菌最陡爬坡实验

选择合适的色素步长，对X₂、分离X₂、表征X₆，及培3个显著因素进行最陡爬坡实验，养基优化结果如表3所示，真菌随X₂，色素X₂，分离X₆含量的表征增加，发酵液中色素吸光度值(Y)先升高后降低，及培在第3组达到最高，养基优化因此以第3组浓度作为响应面实验的真菌中心点。

6、色素响应面实验设计及结果

根据最陡爬坡实验结果，分离对X₂，X₂，X₆进行响应面设计，各因素水平如表4所示，响应面试验设计及结果如表5所示。对实验结果进行数学方程拟合，得到色素吸光值(Y)与3个显著性因素的二次回归模型：

吸光值=1.0037+0.0204X₂+0.0489X₄+0.0442X₆-0.1100X₂X₂-0.0925X₄X₄-0.1522X₆X₆-0.0132X₂X₄+0.0595X₂X₆+0.0640X₄X₆

有回归模型的方差分析(表6)可知：F=8.08、P=0.017(P＜0.05)表示回归模型显著，决定系数R²=0.9357(R²＞0.85)，失拟项P=0.052(P＞0.05)表示失拟项不显著、回归模型拟合度良好。由表7可知X₂X₂，X₄X₄的P值小于0.05，表明NaN0₃、MgS0₄·7H₂0的二次项对模型具有显著影响，X₆X₆的P值小于0.01，表明CS的二次项对模型具有极显著影响，而一次项和交互项的显著性较差，也验证了各因素与响应值之间不是线性关系。

利用Minitabl7得到该模型X₂、X₄、X₆的极值分别为0.1313、0.3333、0.2323，结合最陡爬坡实验设计的原理得到X₂、X₄、X₆的真实值分别为0.6803、0.0366、14.4646，实际操作中可取X₂=0.68、X₄=0.037、X₆=14.5，故优化后的发酵培养基的配方为：NaNO₃ 0.68g/L，K₂HPO₄ 0.48g/L，MgSO₄·7H₂O 0.037g/L，CaCl₂·2H₂O 0.036g/L，葡萄糖18g/L，CS14.5mL/L，TM1mL/L。经过重复性实验得到优化后培养基中色素吸光度值为1.004，是优化前0.612的1.64倍。

三、结论

（1）真菌DT06产生的黄色色素是一种新色素，为多羟基化合物。

（2）DT06色素有良好的抗氧化性和稳定性，具有潜在应用价值。

（3）培养基优化后DT06色素的产量是优化前的1.64倍。

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