茉莉花白绢病露天接种技术及盆栽抗病性鉴定（一）

茉莉花，茉莉系木犀科素馨属绿灌木，花白原产于印度，绢病接种技术及盆鉴定根据花冠轮数，露天常分为单瓣茉莉、栽抗双瓣茉莉、病性多瓣茉莉三种类型。茉莉茉莉花花量大，花白花期长，绢病接种技术及盆鉴定花香持久、露天被誉为“天下第一香”，栽抗是病性著名的花茶和香精原料，还具有较高的茉莉观赏和药用价值。我国种植茉莉花已有2000多年的花白历史，现在我国广西横县、绢病接种技术及盆鉴定福建福州市、四川犍为县及云南元江县等地规模种植，种植面积12300hm2，年产鲜花120600t，年产茉莉花茶110800t，是重要的“一带一路”经济植物。白绢病是茉莉花最主要的病害，近年来发生日益严重，可导致茉莉花大面积枯死，严重影响茉莉花的产量及品质，成为制约产业发展的瓶颈问题。
茉莉白绢病，俗称白毛病、菜籽病，是土栖真菌齐整小核菌引起的一种土传根部危险性病害。该病菌的寄主范围极广，包括花生、芝麻、番茄、辣椒、苹果等近100个科500多种植物，且病菌菌核在土壤中可存活5～6a，因此很难防治，在国内外茉莉花产区普遍发生，发病率可达36.5%，甚至完全毁灭种植园。国内外已有不少针对该病的化学防治及生物防治的相关研究报道，但有些化学药剂残留期较长，易造成环境污染。而以微生物菌剂、菌肥为主要载体的生物防治措施，防治成本较高，且生防菌的定殖易受土壤pH、水分、温度等环境因素的影响，防治效果尚不够稳定。种植抗病品种是防治作物病害最经济有效的防治手段。种质资源是育种的物质基础，鉴定抗病种质是抗病育种的基础工作。国内外已有开展花生种质对白绢病抗性鉴定的报道，Sennoi等进行了洋姜白绢病室内抗性鉴定，Gholami等开展了菜豆抗白绢病评价。而茉莉花白绢病抗性评价及抗病资源筛选的相关研究尚未见报道。

本研究以收集的18份茉莉花品种（系）及8份素馨属其他种为材料，开展了茉莉花白绢病露天接种技术及盆栽抗病性鉴定研究，旨在建立茉莉花白绢病露天接种方法并筛选抗源，为茉莉花抗性育种及种质资源的科学利用提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验地点概况

试验在广西农业科学院花卉研究所露天苗圃（22°48′N、108°22′E）进行，地面新铺黑色地布。试验地属南亚热带季风气候区，年平均气温21.6℃，年均降雨量1304.2mm，平均空气相对湿度79%，无霜期334d。

1.1.2 试验材料

供试材料包括18份茉莉花品种（系），8份素馨属其他种的植物。茉莉白绢病菌菌株SRNN1分离自广西横县校椅镇茉莉种植园内的感病植株，经纯化鉴定，菌株rDNA-ITS序列GenBank登录号为MT634388。燕麦粒为市售燕麦，千粒重23.87g。病菌培养采用马铃薯葡萄糖培养基（PDA），配方为：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15g，水1L，pH自然。

1.2 方法

1.2.1 带菌燕麦粒的制备

制备方法参考晏立英等的方法，略作修改。将茉莉白绢病菌在PDA培养基平板上28℃培养3d，用灭菌打孔器在菌落边缘打取直径5mm的菌碟，备用。燕麦粒装入三角瓶中，蒸馏水浸泡4h后，倒掉水分，121℃高压灭菌60min。将白绢病菌碟接种于灭菌的燕麦粒中，置于28℃黑暗条件下培养7d，期间每隔12h摇动三角瓶1次，直至所有燕麦粒上均长满菌丝。

1.2.2 不同接种方法的比较

以横县双瓣茉莉的健壮扦插苗为试材，取3年龄种苗移栽到种植盆，种植盆直径18cm，深17cm，栽培基质为黄心土∶泥炭土=4∶1。移栽后露天养护6个月，选取长势一致的盆苗进行接种试验。共设置5种接种方法及对照共6个处理，每个处理10盆，3次重复。参考晏立英等的方法，修改了接种数量形成撒表土法、埋土法、贴茎法，增加覆盖基质或无菌燕麦粉形成盖泥炭法及混合埋土法，具体方法如下：

（1）撒表土法。植株浇透水分，将带菌的燕麦粒撒在植株茎基部周围的土壤表面，15粒/盆。

（2）埋土法。带菌燕麦粒埋入茎基部周围2cm深的土层中，15粒/盆。

（3）贴茎法。带菌燕麦粒粘于透明胶带上，固定于茎基部，15粒/盆。

（4）盖泥炭法。植株浇透水分，将带菌的燕麦粒撒在植株茎基部周围的土壤表面，15粒/盆。覆盖一层2～3cm厚湿透的泥炭土。

（5）混合埋土法。带菌燕麦粒与无菌燕麦粉混合埋入茎基部周围2cm深的土层中，带菌燕麦粒15粒/盆。

（6）对照（CK）。植株浇透水分，将不带菌的燕麦粒撒在植株茎基部周围的土壤表面，15粒/盆。

1.2.3 不同苗龄的植株感病情况比较

以横县双瓣茉莉为试材，选取1、3、5、10、20年苗龄植株移入种植盆，种植盆直径18cm，深17cm，栽培基质为黄心土∶泥炭土=4∶1。移栽后露天养护6个月，选择长势较一致的盆苗进行接种试验，采用带菌燕麦粒埋土法进行接种。每个处理10盆，3次重复。

1.2.4 不同品种（系）抗病性鉴定

供试材料包括18份茉莉花品种（系），8份素馨属其他种的植物，均为扦插繁殖的1年苗龄的盆栽。种植盆直径18cm，深17cm，栽培基质为黄心土∶泥炭±=4∶1。采用带菌燕麦粒埋土法进行接种，每个处理10盆，3次重复。

1.2.5 病情调查

接种后每3d调查1次病情，计算病情指数和发病率。不同接种方法比较试验连续调查14次，其他试验连续调查8次。病情分级标准及计算参照杜婵娟等的方法稍加修改，病情分级标准：0级指未见枯黄病叶病枝；1级指全株<25%以下萎蔫和死亡；3级指全株25%～50%表现萎蔫和死亡；5级：全株＞50%表现萎蔫，但未死亡；7级指整株枯死。病情指数的计算公式为：DI={ [Σ(各级病株×对应级数值)]/(调查总株数×7)}×100。发病率=(发病株数/调查总株数)×100%。

1.2.6 抗性评价方法

采用相对抗病程度评价方法鉴定供试材料的抗性，以病情指数最高的茉莉花品种（系）为对照，计算其他品种的相对抗性。相对抗病指数=(最高病情指数-评价品种病情指数)/最高病情指数。根据抗病指数抗病程度分为5级，免疫：相对抗病指数为1.0；高抗：相对抗病指数为0.80～0.99；抗病：相对抗病指数为0.40～0.79；中感：相对抗病指数为0.20～0.39；高感：相对抗病指数低于0.20。

1.3 数据处理

采用Excel2007软件进行数据处理及作图，采用SPSS11.5软件进行方差分析。

2 结果与分析

2.1 接种方法的比较

以主栽品种横县双瓣茉莉3年生盆栽植株为试材，测试了5种不同接种方法的茉莉发病情况。由结果可知，不同接种方法的茉莉初始发病时间不同，病情指数及发病率亦有不同。接种6d后，埋土法、混合埋土法、贴茎法及盖泥炭法开始发病；接种12d后，撒表土法开始发病（图1）。接种后6～42d，埋土法的病情指数均高于其他处理；接种42d后，埋土法的病情指数高达47.93，显著高于其他接种方法，埋土法与混合埋土法发病率分别达到86.67%和90.00%，二者差异不显著，但显著高于撒表土法、盖泥炭法及贴茎法（图2，表1）。因此，埋土法为茉莉花露天接种白绢病的理想方法。

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