原创：糖类提取与分离必备要点讲解

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一、原创糖的糖类提化学性质

1.氧化反应

单糖分子有醛（酮）基、伯醇基、分离仲醇基和邻二醇基结构单元，必备通常醛（酮）基最易被氧化，点讲伯醇次之。原创反应条件与产物：醛基——羧基；银镜反应：Ag+ →Ag；弗林反应：Cu+→Cu2O↓ 砖红色； Br2/H2O ：褪色；HNO3：醛糖→糖二酸；HIO4、糖类提Pb(Ac)4氧化：邻二醇-OH。分离

2.过碘酸氧化反应

邻二醇、必备氨基醇、点讲羟基醛（酮）、原创羟基酸、糖类提临二酮、分离酮酸、必备某些活性次甲基。点讲对羟基醛（酮）反应慢，对酮酸反应非常慢。在水溶液中进行。

3.糠醛形成反应

多糖加入浓酸反应变成单糖 ，单糖经过浓酸（4~10mol/l）和加热，—3H2O形成糠醛衍生物。

4.缩酮和缩醛化反应

醛和酮在脱水剂的作用下易与具有适当空间的1,3--二醇羟基或邻二醇羟基生成环状的缩醛或缩酮。醛易与1,3-二醇羟基生成六元环状物酮易与顺邻二醇羟基生成五元环状物。常用脱水剂：矿酸、无水氯化锌、无水硫酸铜等。

5.与硼酸的络合反应

许多具有邻二羟基的化合物可与硼酸、钼酸、铜氨、碱土金属等试剂反应生成络合物，据此可用于糖、苷等化合物的分离、鉴定以及构型的确定。

二、糖的提取与分离

1.提取

采集新鲜材料，迅速加热干燥，冷冻保存。提取单糖、低聚糖及苷类化合物常用水或稀醇、醇作为提取溶剂。提取多糖常用冷热水、冷热0.1~1mol/lNaOH或KOH、冷热的1%HAc或苯酚等。

2.糖类化合物的分离

（1）蛋白质去除：

Sevage法：加入多糖水溶液的1/5体积的三氯甲烷，再加入三氯甲烷体积的1/5的丁醇，剧烈振摇20分钟，离心分去水层与溶液层交界处的变性蛋白。温和，需重复五次左右。

酶解法：加入蛋白质水解酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、链霉蛋白酶等。

三氟三氯乙烷法：1份三氟三氯乙烷，加入到1份多糖溶液，搅拌10分钟，离心得水层，水层再用上述溶剂处理2次。

三氯醋酸法：在多糖水溶液中，滴加3%三氯醋酸，直至不再浑浊，5~10℃放置过夜，离心除去胶状沉淀即可。

（2）酸性多糖的分离：季铵盐沉淀法

1~10% CTAB或CP-OH，搅拌下滴加于0.1~1% 多糖溶液中 (pH<9, 无硼砂) 控制季铵盐浓度，可分离不同的酸性多糖，季铵盐及其氢氧化物是一类乳化剂，可与酸性糖形成不溶性沉淀增加溶液pH，或含硼砂缓冲液 (糖酸性增大），与中性多糖形成沉淀。

（3）不同极性多糖的分离：分级沉淀或分级溶解法

分级沉淀法：此种方法适合于分离各种溶解度相差较大的多糖，根据各种多糖在不同溶度的低级醇或丙酮中具有不同溶解度的性质。

分级溶解法：逐次按比例由小到大加入甲醇或乙醇或丙酮，收集不同浓度下析出的沉淀，经反复溶解与沉淀后，直到测得的物理常数恒定。

（4）离子交换色谱

阳离子交换纤维素适用于分离酸性、中性多糖和黏多糖。分离酸性多糖所用的洗脱剂通常是PH相同、离子强度不同的缓冲液。分离中性多糖的洗脱剂则多是不同浓度的硼砂溶液。

（5）纤维素柱色谱

所用洗脱剂是水和不同浓度乙醇的水溶液，流出柱顺序：水溶性大先出柱。

（6）凝胶柱色谱

按多糖分子大小和形状不同分离开来,常用的有葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等，常用洗脱剂是各种浓度的盐溶液及缓冲液，它们的离子强度最好不低于0.02mol/l。出柱顺序：大分子先出柱。

（7）制备型区域电泳

用水将玻璃粉拌成胶状，装柱，用电泳缓冲液（如0.05mol/l硼砂水溶液，PH9.3）平衡3天,将多糖加于柱上端，接通电源，上端为正极、下端为负极，其单位厘米的电压为1.2~2v，电流为30~35mA，电泳时间为5~12小时，电泳完毕后将玻璃粉载体推出柱外，分割后分别洗脱、检测。