响应面法优化槐米中芦丁的溶剂热法提取工艺（一）

芦丁（Rutin），面法又名芸香苷，优化属于多羟基黄酮类化合物，槐米具有抗炎、中芦抗病毒、溶剂热法抗肿瘤、工艺降血脂等多种药理作用，面法在临床上主要用于治疗高血压、优化糖尿病、槐米心血管疾病等多种疾病。中芦此外，溶剂热法芦丁还作为原料被应用于医药、工艺保健品和化妆品行业，面法是优化一种极具开发潜力的天然活性物质。芦丁广泛存在于槐米、槐米桑叶、苦荞麦、小蓟等植物中，其中槐米中的含量较为丰富，是工业提取芦丁的主要原料。

槐米（Flossophorae），豆科植物槐树（SophorajaponicaL.）的干燥花蕾及花。在中医临床上作为止血剂，用来治疗痔疮、子宫出血，并有清肝泻火、治疗肝热目赤的功效。目前从槐米中提取芦丁的方法主要有碱溶酸沉法、醇回流法、微波法和超声法，但这些提取方法存在一定的不足之处，如碱提酸沉法提取率低；醇回流法提取时间长；微波法和超声法使用的超声发生器和微波仪价格昂贵，提取成本较高。因此，探寻一种新的高效、快速、便捷的提取方法就显得尤为重要。

溶剂热法是纳米材料和功能材料合成的常用方法，其主要原理是以有机物或有机物的水溶液为反应溶剂，通过调控反应温度，使密闭体系内的压力升高，从而使得溶剂在高于正常溶剂沸点温度的情况下仍保持液体状态，但其物理化学性质，如，表面张力、极性、氢键等发生改变，进而提高反应速度和产物提取率。目前尚未见应用溶剂热法提取芦丁的文献报道，因此本试验对该提取方法进行了研究，并采用响应面法对该法进行了优选，以期为芦丁的提取提供一种新方法，同时也为槐米的深度开发提供参考。

一、材料与方法

1、材料与仪器

槐米（洛阳中药材市场，粉碎过80目筛，备用）；冰乙酸（分析纯），天津市科密欧化学试剂有限公司；芦丁对照品，大连美仑生物技术有限公司；甲醇、乙腈、磷酸均为色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司；水为超纯水。天美LC2000液相色谱仪，上海天美科学仪器有限公司；CT14RD高速离心机，上海天美生化仪器设备有限公司；BT125D双量程电子分析天平，德国多利斯公司；聚四氟乙烯内衬的不锈钢反应釜，福建物质结构研究所；PHG9246A电热恒温鼓风干燥箱，上海精宏实验设备有限公司。

2、试验方法

（1）色谱条件

色谱柱：KromasilC18柱子（250×4.6mm，5μm），流动相：甲醇-水-冰乙酸（46∶52∶2，v/v）；流速：1mL/min；检测波长：360nm；进样量：20μL；柱温：室温。

（2）芦丁标准曲线的绘制

精密称取芦丁对照品10.0mg，50%甲醇溶液定容于200mL容量瓶中，移取芦丁对照品溶液5mL、10mL、15mL、20mL、25mL分别置于100mL容量瓶中，50%甲醇定容。按照色谱柱：KromasilC18柱子（250×4.6mm，5μm），流动相：甲醇-水-冰乙酸（46∶52∶2，v/v）；流速：1mL/min；检测波长：360nm；进样量：20μL；柱温：室温色谱条件进样，采用峰面积外标法绘制芦丁浓度（X）与峰面积（Y）的回归方程。

（3）单因素试验

称取槐米0.20g，置于25mL聚四氟乙烯内衬的不锈钢反应釜中，加入一定浓度的乙醇溶剂，在设定的条件下（考察乙醇浓度、提取时间、提取温度、液料比）进行提取。提取结束后，自然冷却至室温。移取2.0mL提取液以8，000r/min离心3min，取上清液0.5mL于100mL容量瓶中，50%甲醇定容，摇匀，过0.45μm滤膜，取续滤液作为供试液。检测芦丁含量，按下式计算样品中芦丁的提取率Y。

芦丁提取率Y（%）=C×V×n/10⁴M；

式中C为提取液中芦丁浓度（μg/mL），V为提取溶剂的体积（mL），n为稀释倍数，M为槐米质量（g）。

（4）响应面试验设计

在单因素试验基础上，依据Design-Expert8.0.6.1软件中的CentralComposite设计原理，选乙醇浓度（A）、提取时间（B）、提取温度（C）和液料比（D）为4个考察因素，芦丁提取率（Y）为响应值，进行四因素五水平的试验设计，以确定槐米中芦丁最佳提取工艺条件。因素水平表见表1。

二、结果与分析

1、芦丁含量的测定

图1是芦丁标准品和样品的高效液相谱图。从图中可以看出，在以上色谱条件下，芦丁峰形对称，可用于溶液中芦丁含量的测定。同时，以峰面积为纵坐标（Y），芦丁浓度为横坐标（X），得到芦丁的标准曲线方程为：Y=32120X-12042，R²=0.9993。芦丁浓度在2.5～12.5μg/mL范围内线性关系良好。

2、单因素试验分析

（1）乙醇浓度

称取0.20g的槐米粉末5份，分别加入水、25%乙醇、50%乙醇、75%乙醇和乙醇16mL于聚四氟乙烯的反应釜内，90℃提取30min，结果见图2。从图中可以看出，乙醇浓度低于50%时，随着乙醇浓度的升高，芦丁提取率随之升高。原因可能是由于乙醇的渗透能力较强，增加乙醇浓度提高了芦丁在提取溶剂与细胞基质之间的溶解平衡，所以乙醇浓度升高有利于芦丁的提取。但芦丁的极性较大，继续提高乙醇浓度，溶剂的极性变小，根据相似相溶原理，芦丁的溶解度会随之变小，因此芦丁的提取率降低。因此，选择乙醇溶度为50%较为适宜。

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