丹参酮的大孔树脂优化工艺及其抗疲劳活性研究（二）

三、丹参大孔实验结果

1、树脂不同条件提取丹参酮纯度结果

通过表1发现当用85%的优化醇在70℃回流提取丹参粉3h后旋蒸、离心得到粗提物，工艺用80%乙醇洗脱后经高效液相色谱仪测得丹参酮提取率为94.96%，及其究该条件为最佳优化条件。抗疲

2、大孔树脂的性研筛选

大孔树脂有吸附迅速、选择性好、丹参大孔操作简单、树脂绿色环保等优点，优化广泛应用于提取优化天然产物。工艺不同类型的及其究树脂由于孔径、极性、抗疲比表面积和对丹参酮的劳活吸附、解吸附能力各不相同，且被吸附材料包含化合物的复杂性对树脂吸附率也有很大影响。

由表2可见，D-201和AB-8的吸附量、吸附率、解析率比D-101的低且具有显著性差异(p＜0.05)，D-290和D-301虽然吸附率很高但解析率过低，尤其是D-290。综合以上因素，选择D101树脂进行接下来的实验。

3、吸附剂和上样浓度对吸附率的影响

由图1得当提取物溶于不同浓度乙醇时，其吸附率有明显差异，在吸附剂为55%乙醇时树脂对丹参酮的吸附效果最好，因此选择55%乙醇为最佳吸附剂。将提取物溶于55%乙醇上样，上样浓度分别为2mg/mL～10mg/mL，由图2得当上样浓度在2、4、6mg/mL时的丹参酮泄露过多，树脂过早达到穿透点，易造成样品浪费；而浓度为10mg/mL时泄漏量较低，效果最好。

4、解吸液浓度对解吸率的影响

由图3知随着解吸液浓度提高，解析率先增大后减小，在解吸液浓度80%时达到最高，所以因此在洗脱中选择80%乙醇进行洗脱。

由图4得，解吸速度为1.0、2.0、3.0BV/h时，解吸率高于75%，而解吸速度为4.0、5.0BV/h时解吸率显著降低。这是因为用一定量的乙醇解吸，如果解吸速度过大，会因为有效成分被树脂吸附，却没有充足时间完全溶于乙醇而造成解吸率较低；而当解吸速度过低时，虽然解吸率高，但解吸用时较长且效率太低，还会因为流出的解吸液不够集中而出现拖尾现象。所以，最佳解吸速度为3.0BV/h。

5、各组小鼠负重游泳时间结果

通过表4发现，各组小鼠负重游泳时间差异有统计学意义(p＜0.05)。阳性对照组与空白组比较，显著增长负重游泳时间(p＜0.05)，丹参酮低剂量组与空白组相比没有显著性差异，而中剂量组和高剂量组与空白组、阳性对照组相比有显著性差异，说明丹参酮在一定程度上促进了小鼠负重游泳，提高了小鼠的耐力。

6、各组小鼠抗疲劳指标测定结果

从表5可以看出，小鼠的血清尿素氮含量结果中，丹参酮中、高剂量组相比于空白组有明显降低且具有显著性差异(p＜0.05)；肝糖原含量的结果中，丹参酮高剂量组较空白组具有显著的差异(p＜0.05)，而阳性对照组和丹参酮低、中剂量组较空白组没有显著性增长(p＞0.05)。小鼠血清乳酸的含量中，丹参酮中剂量组相比于空白组有显著性的降低(p＜0.05)，丹参酮高剂量具有极显著效果(p＜0.01)。以上实验数据说明丹参酮具有一定的抗疲劳功效。

四、结论
疲劳是机体的一个复杂生理生化变化的过程，若长期疲劳得不到缓解，还会发展为慢性疲劳，危害人身心健康。研究表明，丹参提取物具有明显的抗疲劳、抗氧化作用，但是目前丹参酮的提取率不高。故本实验对丹参酮的抗疲劳功效进行研究，并对提取分离过程进行优化。

本实验对5种大孔树脂进行筛选，选择D101大孔树脂作为最优树脂来优化丹参酮的提取工艺，并对优化过程中吸附剂、上样浓度、解吸液浓度、上样流速进行筛选。研究结果表明，用85%的醇在70℃回流提取3h后旋蒸、离心得到粗提物用55%乙醇溶解上样，上样浓度为10mg/mL，用80%乙醇以3BV/h速洗脱12BV得到丹参酮，经高效液相测得纯度为94.96%。

动物实验结果表明，丹参提取物丹参酮可以明显延长小鼠负重游泳时间。当在耐力运动时会消耗大量能量，肝糖原首先分解入血，避免低血糖引起中枢神经系统疲劳感。本实验显示注射丹参酮可以增加小鼠肝糖原含量，延缓产生的疲劳。当剧烈运动时，机体蛋白质和氨基酸的分解代谢明显增强，同时生成尿素，而血液内的尿素氮含量与疲劳程度、负荷量大小、机体功能成正相关。本实验表明，注射丹参酮可显著降低小鼠血清尿素氮和血乳酸的含量，减少蛋白质分解供能，提高机体运动能力。

综合实验数据得知，丹参酮的抗疲劳功效显著，同时对其提取分离工艺进行了优化发现纯度有明显提升。但是对于抗疲劳作用还没有进行深入研究探讨，因此在后续实验中要进一步研究。

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