灵芝发酵粉中三萜化合物提取、纯化及结构初步分析（二）

（2）浸泡时间对灵芝发酵粉三萜得率的灵芝影响

由图2可知，不同浸泡时间对灵芝发酵粉三萜化合物的发酵粉中提取得率有极显著影响（p＜0.01）。浸泡80min时三萜得率达到最高值0.6423mg/g，萜化提当浸泡时间在80min以下时，合物灵芝发酵粉三萜得率逐渐上升；当浸泡时间超过80min时，纯化三萜得率在逐渐降低，及结因此，构初选择最佳的步分浸泡时间为80min。

（3）料液比对灵芝发酵粉三萜得率的灵芝影响

由图3可知，不同的发酵粉中料液比对灵芝发酵粉三萜化合物得率是有极显著影响（p＜0.01）。当料液比为1∶30时，萜化提三萜得率最高；料液比过低过高都会使三萜得率降低。合物分析其原因可能为一定量的纯化灵芝发酵粉，加乙醇量过少时，及结不利于灵芝发酵粉中三萜化合物的构初溶出，使得95%乙醇中三萜化合物较少，当料液比增大时，灵芝发酵粉中的三萜化合物全部溶出，三萜得率较高，因此选择的最佳料液比为1∶30。

（4）回流温度对灵芝发酵粉三萜得率的影响

由图4可知，回流温度对灵芝发酵粉三萜得率有极显著性影响（p＜0.01）。当回流温度为85℃时，三萜得率最高，为0.6168mg/g；当回流温度高于85℃时，三萜得率反而逐渐会降低。究其原因为在一定温度范围内，温度越高越有利于灵芝发酵粉中三萜化合物的溶出；当温度过高时，三萜化合物的稳定性受到影响，使其得率降低。故选择回流温度为85℃。

（5）回流时间对灵芝发酵粉三萜得率的影响

由图5可以看出，回流时间对三萜得率的影响极显著（p＜0.01）。回流3h时，三萜得率最高；回流超过3h，三萜得率反而会降低。因此，选择最佳回流提取时间为3h。

（6）回流次数对灵芝发酵粉三萜得率的影响

由图6可以看出，灵芝发酵粉三萜得率随着回流次数的增加呈现上升趋势，在回流次数为5次时三萜得率达到0.6849mg/g，但在提取3次以后，三萜得率提高不明显，故从经济和时间成本考虑，选择提取3次为最佳的提取次数。经方差分析，该范围内，回流次数对三萜得率的影响极显著（p＜0.01），故选择回流次数为3次。

（7）响应面试验结果

试验选取料液比、回流时间、回流温度作为考察因素，根据Box-Behnken试验设计原理，以灵芝发酵粉三萜得率作为响应值，采用3因素3水平进行响应面试验，结果见表2。

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